Bakteri gram negatif adalah kelompok bakteri yang tidak menahan warna lembayung setelah diperlakukan dengan pewarnaan Gram (gram-negative bacteria). Bakteri yang tidak mempertahankan pewarnaan kristal violet selama pewarnaan gram disebut bakteri gram negatif.
Lapisan peptidoglikan, yang bertanggung jawab untuk mempertahankan pewarnaan kristal violet, tipis dalam bakteri gram negatif dan diapit antara membran sitoplasma bagian dalam dan membran luar bakteri. Oleh karena itu, bakteri gram negatif dapat diwarnai dengan pewarnaan bebas, safranin selama teknik pewarnaan gram, memberikan warna merah ke merah muda.
Escherichia coli adalah gram negatif dan digunakan sebagai model organisme dalam sebagian besar studi bakteri. Bakteri gram negatif lebih patogen karena kurang rentan terhadap antibiotik. Resistensi antibiotik dari bakteri gram negatif diberikan oleh membran luar yang ada dalam bakteri ini. Neisseria gonorrhoeae, Pseudomonas aeruginosa dan Yersinia pestis seperti bakteri gram negatif bersifat patogen.